它是原生質體制備提取實驗老搭檔

發布時間：

2021-11-24

概要：

原生質體制備提取實驗不能缺少老搭檔——離心機?。將酶解后的組織液過尼龍網膜，去除未充分消化的組織碎片，選擇與原生質體等滲的buffer清洗原生質體兩次，離心去除碎片（一般采取50-100 g，離心機離心1-2 min左右），最后將原生質體重懸于適當濃度甘露醇中。可參考以下方法來降低原生質體懸液中的碎片占比

　　原生質體制備提取實驗不能缺少老搭檔——離心機,它可以說是原生質體制備提取實驗必備儀器了。

　　原生質體制備提取作用有五點：

　　1.細胞融合。

　　2.原生質體中進行瞬時表達：亞細胞定位，蛋白和核酸相互作用。

　　3.利用膜片鉗技術研究離子通道及原生質體在受光、脅迫和激素作用后的調節機制的研究。

　　4.細胞壁再生、細胞分裂與分化、攝入細胞器、病毒侵染機理、膜透性及離子轉運等基礎理論研究的理想材料。

　　5.被用來作為研究植物細胞鈣信號轉導及其調節機制的理想材料。

　　由此可見原生質體純化的重要性。下面以植物為例，進行簡單講解:

　　纖維素酶和果膠酶能分解植物細胞壁，形成原生質體；加入0．6mol/l甘露醇的目的是維持原生質體正常的形態，防止原生質體吸水脹破；不同植物細胞結構不同，則原生質體結構不同；原生質體的結構由細胞膜、細胞質和細胞核組成。

　　將酶解后的組織液過尼龍網膜，去除未充分消化的組織碎片，選擇與原生質體等滲的buffer清洗原生質體兩次，離心去除碎片（一般采取50-100 g，離心機離心1-2 min左右），最后將原生質體重懸于適當濃度甘露醇中。可參考以下方法來降低原生質體懸液中的碎片占比：

　　1. 提前優化樣本，比如剝去外皮（僅限于研究對象不包含外皮部分的樣本）、棄去質地堅硬的組織和損傷組織。

　　2. 降低離心機離心轉速和時間，去除留在上清中的碎片。